Генетическая экспертиза по определению видовой принадлежности биологических объектов

Порядок производства генетической экспертиза по определению видовой принадлежности биологических объектов

Производство генетической экспертизы по определению видовой принадлежности биологических объектов осуществляется на основании договора с физическим или юридическим лицом, определения или постановления суда, постановления дознавателя или следователя, налогового инспектора, постановления дознавателя таможни, в рамках государственных закупок.

Перед заключением договора заказчик может получить предварительную консультацию, на которой эксперт объяснит основные особенности, уточнит цели заказчика, сформулирует вопросы перед экспертом на которые предстоит ответить в ходе производства экспертизы и разъяснит возможные результаты экспертизы.

Случаи, когда необходима проведение генетической экспертизы по определению видовой принадлежности биологических объектов:

• определение видов живых организмов в случаях каких-либо судебных дел;
• установление видов живых объектов по их следам в следственных действиях;
• ДНК-баркодирование полезно в случаях определения вида грибов, вызывающих заболевания, для диагностики и соответствующего лечения которого нужно быстро и точно определить видовую принадлежность возбудителя;
• в случаях подмены одной продукции другой: жульничество в рыбной торговле, фальсификация лекарственных сборов и т.д.;
• в сельском хозяйстве определение видов необходимо для определения вредителей сельскохозяйственных культур, а также применяется для определения типа посевного материала.

ДНК-баркодирование – это метод решения множества проблем, связанных не только с судебными делами, но и с бытовыми. Генетическая экспертиза по определению видовой принадлежности биологических объектов позволит определить вид подаренного Вам попугая, цветка, каждый год красиво цветущего у бабушки на подоконнике, поможет определить биологическое происхождение экзотического мяса, купленного "за три цены", решить спор между друзьями о собранных в лесу "именно тех грибов", сделать необычный подарок любимому человеку, подарив цветок с "генетическим паспортом" растения, и многое другое. Таким образом, штрихкод ДНК позволяет быстро "узнать в лицо" любой объект биологического происхождения и определить точно его видовую принадлежность.

Для проведения генетической экспертизы по определению видовой принадлежности биологических объектов необходимо предоставить любой материал биологического происхождения. Предпочтительнее (для более успешного выделения ДНК) для определения ДНК-штрихкода предоставлять мягкие ткани живых организмов. Объем биоматериала не должен быть меньше 0,5 см³.

Генетическое исследование биологического материала осуществляется в четыре этапа:Выделение ДНК из биологического материала. Процесс выделения ДНК из клеток является самым важным этапом исследования, и от него зависит дальнейший процесс исследования. В большинстве случаев для этих целей используются коммерческие наборы реактивов ведущих зарубежных фирм-производителей, таких как Applied Biosystems (США), Promega (США), QIAGEN (Германия).

Постановка полимеразно-цепной реакции (ПЦР-реакции). В процессе ПЦР-реакции происходит многократное увеличение (копирование) исследуемого участка ДНК. Этот участок ДНК представляет собой генетический маркер, нуклеотидная последовательность которого различается у всех видов живых организмов. Генетическими маркерами, исследуемыми в ходе генетической экспертизы по определению видовой принадлежности биологических объектов, выступают следующие гены:

• идентификация животных осуществляется по нуклеотидной последовательности гена субъединицы 1 цитохром С оксидазы (COI). Ген COI кодируется митохондриальной молекулой ДНК (мтДНК). Исследование молекулы мтДНК имеет несколько преимуществ по сравнению с исследованием ядерной ДНК: так, например, ее можно выделить из любых тканей организма; копийность мтДНК в одной клетке составляет сотни молекул, в то время как ядерная ДНК имеет только одну копию; мтДНК можно получить из объектов, возраст которых составляет сотни лет. Более подробно о мтДНК читайте в статье "Генетическая экспертиза митохондриальной ДНК (мтДНК)";
• определение видов растений выполняется по нуклеотидной последовательности генов рибулозобисфосфаткарбоксилазы (rbcL) и матуразы К (matK). Эти гены кодируются молекулами ДНК хлоропластов – зеленых пластид, содержащих хлорофилл, благодаря которым происходит фотосинтез. Один хлоропласт может содержать до ста копий молекул хлоропластной ДНК, что делает ДНК хлоропластов удобным объектом генетической экспертизы (так же как и митохондриальную ДНК);
• определение видов грибов осуществляется по нуклеотидной последовательности внутреннего транскрибируемого спейсера ядерной рибосомальной РНК (internal transcribed spacers - ITS). ITS-регион является, во-первых, высоковариабельным между видами грибов. Во-вторых, это высококопийный геномный участок, что позволяет успешно определять штрихкод грибов.
• Определение первичной последовательности (секвенирование) ДНК. Полученный в результате ПЦР-реакции фрагмент ДНК (маркерный ген) подвергается секвенированию по модифицированному методу Сенгера. В результате секвенирования ДНК определяется нуклеотидная последовательность цепи ДНК, являющаяся "ключом" к определению вида живого организма.
• Биоинформатический анализ. Нуклеотидная последовательность ДНК, полученная в процессе секвенирования, сравнивается с различными нуклеотидными последовательностями ДНК, хранящимися в международных базах данных. Нуклеотидная последовательность известного биологического вида, полностью совпадающая с анализируемой нуклеотидной последовательностью, свидетельствует об одинаковом биологическом происхождении и, таким образом, определяет вид живого организма.